豬脂蛋白elisa試劑盒用于測定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中血清白蛋白(HSA)的豬脂蛋白，ELISA試劑盒在實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)相當(dāng)普及，絕大多數(shù)ELISA試劑盒都是用于檢測未知樣本中抗原的濃度。用試劑盒當(dāng)然比自己慢慢摸條件快得多，ELISA試劑盒不僅可以讓實(shí)驗(yàn)更便利，往往還更加精確。ELISA試劑盒可用目測定性，也可用酶標(biāo)測定儀測定光密度(OD)值以反映抗原含量，靈敏度可達(dá)每毫升納克(ng)水平甚至皮克(Pg)水平。
現(xiàn)在市場上的豬脂蛋白ELISA試劑盒既有國產(chǎn)也有進(jìn)口，數(shù)量繁多令人目不暇接，怎樣才能選出*適用的產(chǎn)品呢？首先當(dāng)然得根據(jù)我們所要檢測的分子進(jìn)行檢測，除此以外也還有一些需要加以考量的因素。
1. 抗體類型：單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA，實(shí)際上有時(shí)候二者結(jié)合效果更好。例如，對于雙抗夾心法而言，用多抗進(jìn)行捕獲而單抗進(jìn)行檢測有時(shí)更有幫助。多抗能夠確保捕獲所有抗原，隨后單抗再特異性檢測擁有特定抗原表位的抗原。 雙抗夾心法ELISA中捕獲抗體與檢測抗體（不論多抗還是單抗）的配對很有講究。我們不希望捕獲抗體與檢測抗體競爭抗原上的同一位點(diǎn)，為此我們就需要確保捕獲抗體和檢測抗體所識(shí)別的抗原表位不存在重疊。如果捕獲抗體和檢測抗體之間發(fā)生了沖突，就會(huì)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生較大影響。要避免這一問題，我們可以選擇購買“matchedpair”的捕獲/檢測抗體對，這些打包在一起的抗體是商家經(jīng)過驗(yàn)證才推薦的好組合。
2. 實(shí)驗(yàn)類型：ELISA試劑盒有多種類型，不過它們都有一個(gè)共同特點(diǎn)，就是進(jìn)行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。In-cellELISA和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISPOT是兩種特殊的類型，In-cellELISA需要將微孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行固定和通透化，然后再用抗體原位檢測。ELISPOT有點(diǎn)像蛋白印跡Westernblot，先在帶膜的微孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，然后在膜上檢測細(xì)胞分泌的抗原形成斑點(diǎn)。此外，還需要根據(jù)自身需要選擇96孔板或是384孔板進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)。
3. 檢測方式：如今檢測ELISA有許多途徑，我們可以根據(jù)自己的偏好進(jìn)行選擇。一般ELISA檢測的是酶促反應(yīng)的可溶性產(chǎn)物，抗體上結(jié)合有相應(yīng)的酶（例如通常使用的辣根過氧化物酶HRP），而反應(yīng)體系中添加有相應(yīng)的底物（如3，3-二氨基聯(lián)苯胺DAB）。這種酶促反應(yīng)生成具有特征性的顏色，可以通過分光光度計(jì)進(jìn)行檢測，堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶可以結(jié)合在一抗上，也可以結(jié)合在二抗上，還可以使用鏈霉親和素標(biāo)記的酶與親和素標(biāo)記的一抗結(jié)合。此外ELISA的結(jié)果檢測還包括放射性檢測、熒光檢測、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測等。
4. 交叉反應(yīng)：如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應(yīng)就會(huì)影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)的特異性。其中抗體來源所帶來的兼容性就是交叉反應(yīng)的一個(gè)因素。盡管現(xiàn)在購買源自指定動(dòng)物的抗體越來越容易，我們?nèi)杂斜匾_認(rèn)一下是否會(huì)產(chǎn)生交叉反應(yīng)的問題。在用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA檢測時(shí)，檢測用的二抗必須特異性針對檢測一抗，而不能與捕獲抗體起反應(yīng)。如果檢測用二抗與捕獲抗體結(jié)合，實(shí)驗(yàn)特異性就會(huì)大打折扣。通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測一抗，來避免上述問題。與此同時(shí)，了解試劑盒中提供的buffer也是有必要的，以免這些buffer含有可能影響抗原抗體相互作用的組分，使檢測結(jié)果收到影響。
通常人們使用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)，雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體和檢測抗體之間，這種方法既靈敏又有效，受到了許多研究者的青睞。不過有時(shí)候雙抗夾心法并不是*佳選擇，例如有時(shí)候抗原特別小讓兩個(gè)大抗體難以附著，又或者抗體只有一個(gè)抗體結(jié)合位點(diǎn)。在上述情況下，競爭性ELISA就更為適用，這種方法是采用帶標(biāo)記的純化抗原與樣本中無標(biāo)記的抗原進(jìn)行競爭，以結(jié)合捕獲抗體。
原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司
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