一、添加劑的添加
    1.溫度的掌握：卵黃和抗生素類添加的溫度都不應(yīng)太高。
    2.定量：過多會(huì)抑制一些目標(biāo)菌，太少又導(dǎo)致雜菌的過度生長。

二、培養(yǎng)溫度的掌握
    1.真菌類：25-28℃培養(yǎng)
    2.細(xì)菌類：李氏菌在增菌和生化中要求培養(yǎng)溫度在30℃左右。
    3.其他一般在36℃左右

三、接種方法
常用的方法主要有劃線、三點(diǎn)接種、穿刺接種、傾注接種、涂布接種、液體接種。

四、革蘭氏染色方法
染色時(shí)間的掌握、沖洗的方法。

五、劃線獲得單個(gè)菌落的方法。劃不出單個(gè)菌落的原因
1.平板上有過多的水分；
2.劃線時(shí)接種環(huán)未經(jīng)反復(fù)灼燒。
.多區(qū)劃線，三區(qū)或四區(qū)劃線。

六、涂布和傾注的區(qū)別
1.涂布利于觀察，但由于涂布棒上會(huì)帶有少量的菌液，影響計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。
2.涂布更為準(zhǔn)確，但不利于觀察菌落的狀態(tài)。

七、培養(yǎng)基配制時(shí)應(yīng)注意的問題
1.滅菌溫度要嚴(yán)格控制，按照要求滅菌，尤其含糖量較高的培養(yǎng)基溫度不應(yīng)太高，過高會(huì)導(dǎo)致糖分焦化，影響質(zhì)量。
2.瓊脂培養(yǎng)基不能反復(fù)溶化。反復(fù)溶化會(huì)破壞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分。
3.培養(yǎng)基不能反復(fù)滅菌，反復(fù)滅菌也會(huì)導(dǎo)致營養(yǎng)成分的破壞。
 4.含瓊脂的培養(yǎng)基滅菌后，要搖勻。

八、板的保存
大多數(shù)平板如VRBA、DC、尿素酶生化管、顯色系列等要避光低溫保存。

九、觀察時(shí)間的掌握
按SN、GB等標(biāo)準(zhǔn)或培養(yǎng)基的使用說明所述時(shí)間進(jìn)行觀察，時(shí)間過短或時(shí)間過長，單菌落的特征都不會(huì)很明顯。如單增李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基，時(shí)間短單菌落看不到卵磷脂環(huán)，時(shí)間長綿羊李氏菌也會(huì)產(chǎn)生沉淀環(huán)。OXA、PALCAM的觀察也如此，時(shí)間過長，李氏菌使整個(gè)平板成黑色，不利于觀察單個(gè)菌落。

十、生化實(shí)驗(yàn)
1.接種的方法；
2.氧化型和發(fā)酵型實(shí)驗(yàn)操作；
3.陽性菌種的對(duì)照；
4.接種前的純化。挑取單個(gè)菌落進(jìn)行一系列的生化。

十一、關(guān)于殺菌的幾個(gè)概念
1.抑制：是在亞抑制劑量因子作用下導(dǎo)致微生物生長停止，但在移去這些因子后生長仍可以恢復(fù)的生物學(xué)現(xiàn)象。
2.死亡：在致死劑量因子的作用下或在亞致死劑量因子長時(shí)間的作用下，導(dǎo)致微生物生長能力不可逆喪失，即使移去這種因子后生長仍不能恢復(fù)的生物學(xué)現(xiàn)象。
3.防腐：在某些化學(xué)物質(zhì)或物理因子作用下，能防止或抑制微生物生長的一種措施，它能防止食物腐爛或防止食物霉變。
4.消毒：利用某種方法殺死或滅活物質(zhì)或物體中所有的病原微生物的一種措施，它可以起到防止感染和傳播的作用。
5.滅菌：利用某種方法殺死物體中包括芽孢在內(nèi)的所有的病原微生物的一種措施。
6.化療：利用具有選擇毒性的化學(xué)物質(zhì)，例磺胺、抗生素等對(duì)生物體內(nèi)部被微生物感染的組織或病變細(xì)胞進(jìn)行治療，以殺死組織內(nèi)的病原微生物或病變細(xì)胞，但對(duì)有機(jī)體無毒害作用的治療措施。

十二、產(chǎn)品的保存
1.干粉培養(yǎng)基：避光干燥，結(jié)塊后不能使用。
2.亞碲酸鉀卵黃增菌液、50%卵黃乳液等：冷凍保存，使用時(shí)，要常溫解凍，避免水浴加熱。
3.抗生素類：冷藏保存，溫度過高會(huì)導(dǎo)致靈敏度的下降。
4.兔血漿：冷藏保存少量的紅色不會(huì)影響結(jié)果。