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錢經(jīng)理為客戶解說ELISA抗體的六大常見問題

閱讀次數(shù):849   發(fā)布時(shí)間:2014/12/17 8:40:40

     上月底時(shí),來自吉林大學(xué)的齊老師參與了我公司的優(yōu)惠活動,購買人凝血因子elisa試劑盒。日前,齊老師帶著一些相關(guān)產(chǎn)品使用的疑問咨詢到了錢經(jīng)理:“請問,用于免疫接種的抗原應(yīng)如何制備呢?” 
    錢經(jīng)理答道:抗原應(yīng)溶解在緩沖溶液。不溶性抗原和可溶性的一樣好。理想的抗原濃度是1mg/ml,然而較低濃度也可以接受的。您也可以把含有目標(biāo)蛋白的SDS-PAGE膠發(fā)給我們,將膠放于水中變脫色,因?yàn)榇姿崮苁沟玫鞍踪|(zhì)進(jìn)一步地變性。
    對此,還要注意避免:對動物有毒的添加劑。可接受:低量的SDS、咪唑、尿素、胍,非離子型去污劑,EDTA或EGTA和聚丙烯酰胺。添加的*終的量在很大程度上取決于樣本體積/抗原濃度。 
    齊老師繼續(xù)問道:“選擇哪個(gè)物種用于免疫接種?”
    使用IgG和IgY抗體針對同一抗原的優(yōu)勢:①獨(dú)立確認(rèn)預(yù)期的目標(biāo)蛋白質(zhì)被檢測。②抗體庫具有不同的特性,在不同的技術(shù)中能起到互補(bǔ)的作用雙重染色。③一般從遺傳角度上選擇與抗原有較遠(yuǎn)的親源關(guān)系的物種用于免疫接種。
    回答了以上兩個(gè)問題之后,齊老師這些又問出了四個(gè)常見問題,上海恒遠(yuǎn)錢經(jīng)理都一一仔細(xì)回復(fù)。
1. 問:在我開始實(shí)驗(yàn)前可以測試來源于一些動物的免疫前血清或卵黃嗎?
   答:按照您的要求,在您開始您的實(shí)驗(yàn)前Agrisera會送你幾個(gè)免疫前血清或卵黃樣品。您可以選擇具有背景信號的動物用于測試。
2. 問:在兔子中生產(chǎn)的抗體比那些在雞中生產(chǎn)的更好嗎?
   答:生產(chǎn)抗體的過程是抗原,特異動物免疫反應(yīng)和測試的結(jié)合。如哺乳動物的保守靶標(biāo)蛋白,我們推薦使用在雞中生產(chǎn)的抗體。因?yàn)樗麄冊谶M(jìn)化上親緣關(guān)系更遠(yuǎn),且他們的免疫系統(tǒng)與保守的哺乳動物蛋白反應(yīng)更好,而這些保守哺乳動物蛋白可能不會被山羊或兔子的免疫系統(tǒng)識別。
3. 問:如果我的抗體在免疫定位試驗(yàn)中成功了,是否該抗體在免疫印跡和其它的試驗(yàn)中也能用呢?
   答:再次強(qiáng)調(diào),它取決于抗體識別蛋白質(zhì)的哪一部分和在固定后或免疫印跡后蛋白的哪一部分暴露了。如果多克隆抗體是合成肽,它能識別抗原池,如果這類抗原固定后沒有暴露,抗體將不會識別抗原。在某些情況下在緩沖液中加入6-8M尿素有助于蛋白質(zhì)的暴露。    
4. 問:如何儲存抗體?
   答:血清中的抗體,對于抗體這是一個(gè)非常穩(wěn)定的存儲形式。在-20℃或-70℃的血清通?梢员4娑嗄。在一些特殊的情況下,anti-peptide抗體儲存的時(shí)間更短。短時(shí)間可以儲存在4℃。在某些情況下操作要更加小心,步在-20℃冷凍,之后放于-70℃冷凍的效果更好。  
    上海恒遠(yuǎn)給出的常規(guī)建議:
     ① 對于較大體積的親和純化抗體,濾滅的抗體樣本和分成等份的液體避免多次凍融。
     ② 存儲蛋白質(zhì)的濃度在0.5-1mg/ml。
     ③ 檢查蛋白質(zhì)在不同儲存條件下的穩(wěn)定性,尤其是IgM。
    錢經(jīng)理為客戶解說ELISA抗體的六大常見問題,齊老師對我司的售后服務(wù)贊不絕口。非常感謝吉林大學(xué)齊老師對我公司的大力支持!

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